Хочете забезпечити надійність ПЛР-досліджень у своїй лабораторії? Дізнайтесь, як правильно використовувати систему контролів і чому це критично важливо — читайте повну статтю.
Контролі ПЛР: негативний, позитивний та внутрішній контроль. Як читати Ct і працювати зі стандартами
Практичний гід для лабораторій: як локалізувати помилки, інтерпретувати Ct та впевнено працювати з кількісними стандартами.
Чому контролі ПЛР важливі
ПЛР складається з послідовних етапів — від екстракції нуклеїнових кислот до ампліфікації та детекції. Контрольні проби дозволяють оперативно локалізувати проблему, якщо результат неочікуваний або сумнівний, і зрозуміти, на якому етапі вона виникла.
Негативний контроль (NTC)
NTC (No Template Control) — реакція з усіма компонентами ПЛР (полімераза, праймери, dNTP, буфер), але без цільового шаблону. Будь-яка ампліфікація в NTC означає забруднення реактивів, витратних матеріалів або обладнання сторонньою ДНК/РНК.
- Симптом: ампліфікація в NTC.
- Дії: замінити реагенти, перевірити чистоту робочих зон, змінити наконечники/плашки, повторити постановку.
- Висновок: результати серії слід вважати недійсними.
Позитивний контроль
Містить цільовий фрагмент у відомій концентрації (або гарантовано наявний). Якщо позитивний контроль не ампліфікується, можливі причини:
- Пошкоджені або прострочені реагенти;
- Неправильні умови ПЛР (температурний профіль, концентрації, Mg2+);
- Несправність термоциклера або помилки налаштування каналу флуоресценції.
Роль: підтверджує, що реакція здатна працювати за заданих налаштувань.
Внутрішні контролі (Internal Controls)
Ампліфікуються разом із цільовим фрагментом у тій самій пробірці, перевіряючи якість екстракції та наявність інгібіторів.
Ендогенний внутрішній контроль
- Стабільно присутній ген зразка (напр., ACTB/β-актин у людини).
- Показує якість виділення та відсутність інгібіторів.
Екзогенний внутрішній контроль
- Штучно введений фрагмент, доданий ще на етапі екстракції.
- Дозволяє виявляти збої як у ПЛР, так і в процедурі виділення.
- Концентрація/праймери підібрані так, щоб не пригнічувати цільову ампліфікацію.
Ct (Cycle threshold) та інтерпретація
Ct — цикл, на якому сигнал перетинає поріг. Більшість виробників вказує інтервал достовірності (часто до 35–38 циклів). Значення вище порогових можуть відповідати дуже низькій кількості копій або технічним артефактам.
Оцінюйте Ct цілі разом із Ct внутрішнього контролю для кожної пробірки — це підтверджує коректність реакції, відсутність інгібіторів та успішну екстракцію.
Кількісні стандарти та калібрувальні криві
Для кількісних задач (вірусне навантаження, експресія генів) ставте стандарти з відомою кількістю копій. Порівнюючи отриманий Ct з калібрувальною кривою, розраховуйте реальні копії/мл або відносну експресію.
- Навіщо: моніторинг перебігу хвороби, оцінка ефективності терапії, аналіз експресії генів.
- Порада: включайте щонайменше 4–5 точок стандартів, покриваючи потрібний динамічний діапазон.
Як обрати тест-систему
- Наявність екзогенного внутрішнього контролю (оцінка екстракції та інгібіторів).
- Валідація виробником, заявлені чутливість і специфічність.
- Чітка інструкція: оптимальні умови, пороги Ct, troubleshooting.
Потрібні реагенти або консультація? Перегляньте
реагенти для ПЛР та
набори для екстракції або
зв’яжіться з нами.
FAQ: часті запитання
Що робити, якщо NTC показує ампліфікацію?
Зупинити видачу результатів, замінити реагенти, перевірити чистоту зон та витратних матеріалів, повторити постановку. Позитивний NTC = забруднення.
Позитивний контроль «мовчить». У чому причина?
Частіше за все — деградація реагентів, помилки в температурному профілі або несправність каналів детекції. Перевірте профіль, змініть партію реагентів, протестуйте інший канал/блок.
Який Ct вважати достовірним?
Орієнтуйтесь на інструкцію виробника (часто до 35–38 циклів). Значення вище — перевіряйте повторюваність, внутрішній контроль і NTC.
Чим відрізняються ендогенний та екзогенний внутрішні контролі?
Ендогенний — власний стабільний ген зразка (оцінка якості зразка/інгібіторів). Екзогенний — доданий маркер (контролює також екстракцію; не має пригнічувати ціль).
.news-article{–tx:#111827;–muted:#6b7280;–brand:#009486;–bd:#e5e7eb;font-family:”Montserrat”,system-ui,-apple-system,sans-serif;color:var(–tx);line-height:1.65} .na-hero{margin:0 0 16px} .na-hero img{width:100%;height:auto;border-radius:16px;display:block} .na-hero figcaption{font-size:14px;color:var(–muted);margin-top:8px} .na-header h1{font-size:clamp(26px,3.5vw,40px);margin:.4em 0 .2em;font-weight:800} .na-sub{color:var(–muted);margin:0 0 12px} .na-toc{background:#f8f9fa;border:1px solid var(–bd);padding:12px 16px;border-radius:12px;margin:20px 0} .na-toc a{text-decoration:none;color:var(–brand)} .na-section{margin:28px 0} .na-section h2{font-size:clamp(22px,3vw,30px);margin:0 0 8px} .na-section h3{font-size:clamp(18px,2.2vw,22px);margin:12px 0 6px} .na-section ul{padding-left:20px} .na-fig{margin:16px 0} .na-fig svg{width:100%;height:auto;border:1px solid var(–bd);border-radius:12px;background:#fff} .na-fig figcaption{font-size:14px;color:var(–muted);margin-top:6px} .na-cta a{color:#fff;background:var(–brand);padding:8px 14px;border-radius:12px;text-decoration:none} .na-faq details{border:1px solid var(–bd);border-radius:10px;padding:10px 12px;margin:10px 0;background:#fff} .na-faq summary{cursor:pointer;font-weight:600} @media (min-width: 1100px){ .news-article{max-width:1100px;margin:0 auto;padding:0 12px} }
{
“@context”:”https://schema.org”,
“@type”:”Article”,
“headline”:”Контролі ПЛР: негативний, позитивний та внутрішній контроль. Як читати Ct і працювати зі стандартами”,
“datePublished”:”2025-08-19″,
“dateModified”:”2025-08-19″,
“author”:{“@type”:”Organization”,”name”:”ДІАМЕБ Трейд”},
“publisher”:{
“@type”:”Organization”,
“name”:”ДІАМЕБ Трейд”,
“logo”:{“@type”:”ImageObject”,”url”:”/wp-content/uploads/logo.png”}
},
“image”:”/wp-content/uploads/2025/08/pcr-controls-hero.jpg”,
“articleSection”:[“ПЛР”,”qPCR”,”Лабораторна діагностика”,”Контроль якості”],
“keywords”:”ПЛР, qPCR, контрольні проби, NTC, позитивний контроль, внутрішній контроль, Ct, калібрувальна крива, кількісні стандарти”
}
{
“@context”:”https://schema.org”,
“@type”:”FAQPage”,
“mainEntity”:[
{“@type”:”Question”,”name”:”Що робити, якщо NTC показує ампліфікацію?”,”acceptedAnswer”:{“@type”:”Answer”,”text”:”Зупинити видачу результатів, замінити реагенти, перевірити чистоту зон та витратних матеріалів, повторити постановку. Позитивний NTC = забруднення.”}},
{“@type”:”Question”,”name”:”Позитивний контроль «мовчить». У чому причина?”,”acceptedAnswer”:{“@type”:”Answer”,”text”:”Ймовірні причини: деградація реагентів, помилки в температурному профілі або несправність каналів детекції. Перевірте профіль, змініть партію реагентів, протестуйте інший канал/блок.”}},
{“@type”:”Question”,”name”:”Який Ct вважати достовірним?”,”acceptedAnswer”:{“@type”:”Answer”,”text”:”Орієнтуйтесь на інструкцію виробника (часто до 35–38 циклів). Значення вище перевіряйте на повторюваність, внутрішній контроль та NTC.”}},
{“@type”:”Question”,”name”:”Чим відрізняються ендогенний та екзогенний внутрішні контролі?”,”acceptedAnswer”:{“@type”:”Answer”,”text”:”Ендогенний — стабільний ген зразка; екзогенний — доданий маркер, що контролює також етап екстракції. Обидва не мають пригнічувати цільову ампліфікацію.”}}
]
}
info@diameb.ua
Гематологія
Імунохемілюмінесцентний аналіз
Паразитологія
Клінічна хімія
Полімеразна ланцюгова реакція
Аналіз сечі
Гемостаз та групи крові
Дозатори
Аналіз електролітів
Експрес-діагностика
Системи забору крові
Імуноферментний аналіз
Швидкі тести
Ветеринарія